食物中硒的測定

發布時間：2005-08-23

熒光法
1. 原理
樣品經混合酸消化后，硒化合物被氧化為四價無機硒（Se4+）,與2，3二氨基萘（2,3-diaminonaphthalene,簡稱為DAN）反應生成4，5－苯丙丕硒腦（4,5-benzo piaselennol）,其熒光強度與硒的濃度在一定的條件下成正比。用環己烷萃取后于激發光波長376nm ,發射光波長520nm處測定熒光強度與繪制的標準曲線比較定量。本方法檢出限為3ng。
2. 方法來源
GB/T 12399 -1996，本方法是測定食物中微量元素硒的國家標準方法。
3．儀器和設備
1) 實驗室常用設備
2) 熒光分光光度計
4. 試劑
除說明外均為分析純。實驗用水為去離子水。
4.1 環己烷
4.2 硝酸
4.3 過氯酸
4.4 鹽酸
4.5 氫溴酸
4.6 （1＋9）鹽酸溶液
4.7 (1+1)氨水
4.8 (5+95) 去硒硫酸：取5ml去硒硫酸，加入95ml水中。
去硒硫酸：取200ml硫酸，加于200ml水中，再加30ml氫溴酸，混勻，置沙浴上加熱蒸去硒與水至出現濃白煙，此時體積應為200ml。
4.9 0.2 mol/L EDTA: 將37g EDTA二鈉鹽，加水并加熱溶解，冷卻后稀釋至500ml。
4.10 10% 鹽酸羥胺：稱取10g鹽酸羥胺溶于水中，稀釋至100ml。
4.11 混合酸：硝酸＋過氯酸（2＋1）
4.12 0.1% 2,3-二氨基萘（純度為95～98%）：需在暗室配制，稱取200mgDAN于一帶蓋三角瓶中，加入200mL0.1mol/L鹽酸，振搖約15min，使其全部溶解，約加40mL環己烷，繼續振搖5 min ,將此液體轉入分液漏斗中，待溶液分層后，棄去環己烷層，收集DAN層溶液。如此用環己烷純化DAN直至環己烷中的熒光數值降至最低時為止（純化次數視DAN純度不同而定，一般約需純化3－4次）。將提純后的DAN溶液儲于棕色瓶中，約加1㎝厚的環己烷覆蓋溶液表面。置冰箱中保存。必要時再純化一次。
4.13 硒標準溶液
A) 硒標準儲備液（100μg/mL）：精確稱取100.0mg元素硒（光譜純），溶于少量硝酸中，加2mL過氯酸，置沸水浴中加熱3－4h，冷卻后加入8.4mL鹽酸，再置沸水浴中煮2min。準確稀釋至1000mL，其鹽酸濃度為0.1mol/L。此儲備液濃度為100μg/mL。
B) 硒標準使用液（0.05μg/mL）：將4.13.1液用0.1mol/L鹽酸稀釋，使含硒為0.05μg/mL。于冰箱中保存。
4.14 0.02％甲酚紅指示劑：稱取50mg甲酚紅溶于水中，加（1＋1）氨水1滴，待甲酚紅完全溶解后加水稀釋至250mL。
4.15 EDTA混合液：取0.2mol/L的EDTA（4.9）和10％鹽酸羥氨（4.10）液各50mL，混勻，再加5mL（4.14）溶液，用水稀釋至1L。
5. 分析步驟
5.1 樣品處理及消化
1) 糧食：樣品用水洗三次，于60℃烘干，用不銹鋼磨磨成粉，儲于塑料瓶內，放一小包樟腦精，蓋緊蓋保存，備用。
2) 蔬菜及其他植物性食物：取可食部分用水沖洗三次后用紗布吸去水滴，用不銹鋼刀切碎，取混合均勻的樣品于60℃烘干，稱重，粉碎，備用。
3) 稱取0.5－2.0g樣品（含硒量0.01－0.5μg）于磨口三角瓶內，加10mL（5＋95）去硒硫酸，樣品潤濕后，再加20mL混合酸液放置過夜。次日于沙浴上逐漸加熱，當激烈反應后（溶液變無色），繼續加熱至產生白煙，溶液逐漸變成淡黃色即達到終點。某些蔬菜樣品消化后常出現渾濁，難以確定終點，所以要細心觀察。另外，含硒較高的蔬菜含有較多的Se6+，需要在消化達到終點時冷卻后加10mL（1＋9）鹽酸，繼續加熱，使Se6+還原成Se4+。同樣按上述方法確定終點。
5.2 測定
于樣品消化液中加20mLEDTA混合液，用氨水（1＋1）或鹽酸調至淡紅橙色（pH 1.5～2.0）。以下步驟在暗室進行：加3 mLDAN試劑，混勻，置沸水浴中煮5min，取出立即冷卻，加3mL環己烷，振搖4min，將全部溶液移入分液漏斗，待分層后棄去水層，環己烷層轉入帶蓋試管中，小心勿使環己烷中混入水滴，于激發光波長376，發射光波長520nm處測定丕硒腦的熒光強度。
5.3 硒標準曲線繪制：準確吸收硒標準使用液0，0.2，1.0，2.0及4.0mL加水至5mL，按樣品測定步驟同時進行。硒含量在0.5μg以下時熒光強度與硒含量呈線性關系，在常規測定樣品時，每次需做試劑空白與樣品硒含量相近的標準管（雙份）即可。
6．結果

式中：X--樣品中硒含量，μg/g；
A--標準管熒光讀數；
B--空白管熒光讀數；
C--樣品管熒光讀數；
m1--標準管中硒質量，μg；
m2--試樣質量，g。
7．注意事項
7.1 結果的允許差：同一實驗室平行測定或重復測定結果相對偏差絕對值≤10％。
7.2 硒含量在0.5μg以下熒光強度與硒含量呈線性關系，超過0.5μg時為非線性關系，故硒含量應控制在0.5μg以內。硒含量過高時要先用環己烷稀釋樣品，再測定熒光。
7.3 我國高硒地區食物樣品中的硒，多以Se6+形式存在，故應在消化到終點后，加（1＋9）HCl還原后繼續消化至終點再測定。

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