茶多糖生物活性與結構的研究進展

發布時間：2005-09-13

　　糖類是自然界最多的有機化合物，也是重要的生物高分子化合物和重要的信息分子。多糖及糖復合物分布廣泛，功能多種多樣，它們參與了細胞各種生命活動的調節。有的多糖具有特殊生物活性，是一種免疫調節劑，且無毒副作用，而被作為臨床用藥或疫苗。茶多糖ＴＰＳ能降血糖、防治糖尿病，還具有降血脂、抗動脈粥樣硬化、降血壓、抗凝血、抗血栓、防治心血管疾病等作用，它還能使血清凝集素抗體增加，從而增強機體免疫功能。
　　我國研究較多的多糖類是微生物來源多糖，現已發現有價值的真菌多糖近３０種，其中化學結構較清楚的有１５種，香菇多糖是研究最多、較為深入的多糖之一，但至今對其活性與構效關系并不清晰，僅了解其結構與免疫活性相關的是β葡聚糖物質。這些研究的深入，將為發現更有效的新多糖起指導作用，也將對藥物學、分子生物學的理論作出貢獻。
茶多糖生物活性與結構，這些年已有所研究，且取得了一些進展。本文對這方面的研究進行綜述，并提出一些問題進行探討。
　　一、茶多糖的提取與分離
　　茶多糖的提取，通常是將茶葉磨碎，用熱水７０～１００℃浸泡３０ｍｉｎ，浸泡液減壓濃縮后，加入３倍體積乙醇沉淀、離心，沉淀物再用少量水溶解，重復醇沉淀一次，沉淀物用無水乙醇、丙酮、乙醚交替洗滌三次，真空低溫干燥，得茶多糖粗制品，得率為１２％～１８％。該粗制品中茶多糖含量為２７５２％～２９３２％，茶多酚含量為１１８６％～１４４９％，可溶性蛋白含量為１５０％～１７８％。茶多糖的提取應避免在強酸強堿溶液中進行，否則易使茶多糖中糖苷鍵斷裂及構象變化，從而失去或降低生物活性。茶多糖提取也可用冷水、稀堿、稀酸或稀鹽進行，若用稀酸提取，時間宜短，溫度不宜超過５℃；用稀堿提取，應在氮氣中進行，以防止多糖降解；熱水浸提得率高于冷水。
　　茶多糖的初步純化是采用Ｓｅｖａｇ方法除去蛋白質，此法條件溫和，但效率不高，茶多糖粗制品中游離蛋白質含量在１０％左右。經Ｓｅｖａｇ法脫蛋白４～５次后，用蒸餾水透析２４ｈ，然后經醇析，真空低溫干燥可得到茶多糖。
　　茶多糖的進一步純化，有多種方法，如ＤＥＡＥ纖維素柱層析、凝膠層析分離、凝膠電泳法與ＨＰＬＣ法等。如茶多糖用少量水溶解后，再通過ＳｅｐｈａｄｅｘＧ７５柱２６ｃｍ×８０ｃｍ與ＳｅｐｈａｄｅｘＧ１５０柱１５ｃｍ×６０ｃｍ層析，可進一步純化。用０１ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ洗脫，收集含糖部分，醇析后透析，真空低溫干燥可得茶多糖純品。
　　二、茶多糖的純度及其測定方法
　　茶多糖的純度標準不能用通?；衔锏募兌葮藴蕘砗饬?，因為茶多糖純品其微觀上也是不均一的，其純度只代表相似鏈長的平均配布，純品也僅是一定分子質量范圍的均一組分。茶多糖的純度可用物理與化學方法檢測：①用水解法在重復純化過程中單糖組成及其比例不變，理化性質溶解度、比旋度等也不變，則表明是均一組分。②多糖溶液也可以進行密度梯度離心，在６００００ｒ／ｍｉｎ以上可得到單一峰，即說明多糖是均一組分。③茶多糖經凝膠層析得一對稱峰，也證明茶多糖為均一組分。④茶多糖經高壓電泳，如呈單一色斑，則表示茶多糖為均一組分。目前，采用高效液相層析或凝膠層析來檢測茶多糖的分離純化度。
　　三、茶多糖的化學組成
　　茶多糖由茶葉中的糖類、蛋白質、果膠和灰分等物質組成，茶新梢的粗老葉中含量較高。茶多糖為水溶性，易溶于熱水，不溶于高濃度的有機溶劑。高溫下易喪失活性，過酸或偏堿均會使多糖部分降解。從分離純化后的茶多糖的紫外吸收圖譜能表明茶多糖中存在蛋白質，即茶多糖中多糖與蛋白質呈緊密結合態。純化后茶多糖中糖蛋白含量為８８９３％，可與多種金屬元素絡合。清水岑夫等從茶葉冷水提取物中分離的茶多糖，分子量為４００００，由阿拉伯糖、核糖和葡萄糖５１∶４７∶１７組成；王丁剛等提取的茶多糖分子量為９１０００，由巖藻糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖０２３∶１０４∶０６２∶２４３∶１００組成；汪東風等分離的茶多糖分子量為１０７０００，由阿拉伯糖、木糖、巖藻糖、葡萄糖、半乳糖５５２∶２２１∶６０８∶４４２∶４１９９組成；陳海霞等用熱水提取茶多糖后，用醇沉淀或超濾醇沉淀等方法分離制取茶多糖，所制茶多糖由葡萄糖、阿拉伯糖、木糖、核糖、半乳酸及半乳糖醛酸組成，但制取工藝不同組成比例也不同。這些報道中茶多糖組成差異被認為與所用茶葉原料和提取分離方法不同有關。但也可粗略看出，茶多糖的單糖組成是以半乳糖、葡萄糖和阿拉伯糖為主，還有木糖和甘露糖等。至今茶多糖中單糖存在鍵型及其連接方式尚未分析清楚，至于高級結構更未觸及。
　　四、茶多糖化學組分的結構分析
　　茶多糖經過分離純化，被確認為單一多糖后便可進行結構分析，已使用的分析手段主要有物理方法和化學方法。物理方法常使用的有：①ＧＣ和ＧＣＭＳ聯用方法：用于測出多糖的組成及各單糖之間的摩爾比，此法要求所測樣品具有一定的揮發性，因此待測樣品多需制備成硅烷衍生物和乙?；苌锏?。②核磁共振光譜ＮＭＲ法：用于確定多糖結構半糖苷鍵的構型以及重復結構中單糖的數目。一般用１ＨＮＭＲ圖測定簡單多糖，１３ＣＮＭＲ測定復雜的多糖，因為后者的化學位移較寬些。③紫外光譜法：在２６０～２８０ｎｍ處用于檢測多糖中是否含有蛋白質、核酸、多肽類。④紅外光譜法：用于確定吡喃糖的糖苷鍵構型及其他官能團?；瘜W方法中以酸水解法應用最多，它可分為完全水解法和部分酸水解法，用于鑒定多糖中單糖組分或多糖中的低聚糖。其他化學方法有過碘酸氧化、Ｓｍｉｔｈ降解、甲基化反應、堿降解等化學降解法，用于多糖結構中苷鍵的構型、單糖之間的連接部位確定等。但在使用時，通常需要物理方法和化學方法結合起來，才能完成多糖的結構測定。
　　五、茶多糖的活性與結構
　　多糖糖鏈龐大或修長，如具有生物活性，必然存在活性中心或片段，也就是說，研究多糖的結構必須尋找活性中心結構。多糖的結構，首先應確定其一級結構，再深入其高級結構，多糖結構確定是困難的，特別是雜多糖結構確定難度更大，這里涉及到的因素很多，首先是多糖的分級純化，粗制多糖是非常復雜的大混合物，其中有生物大分子混合，如不同多糖中性多糖、酸性多糖和雜多糖的混合，還有同種多糖大小分子的混合等，這就必須采用適合其特點的方法來分離分級純化，否則多糖不純，結構確定有困難。實踐表明，同一綠茶樣品用不同分級方法茶多糖得率及其生物活性常有不同結果。從同一綠茶樣品中，可分離出幾種結構、分子大小、溶解度、粘度不同的多糖，其藥物活性也有差異。也有許多試驗結果表明，粗多糖經過逐步純化，其藥物活性并未見增加，這被認為是多糖的藥物活性可能是由不同多糖共同作用的結果。因此，研究茶多糖時即應研究分級純化的多糖結構，也應注意混合多糖的結構變化，特別是構象變化，水溶性多糖混合物，糖鏈間氫鍵的交聯，必然會引起構象變化，從而影響到生物活性。
　　總之，多糖的結構和生物活性關系是多糖研究的熱點與難點，現已清楚高級結構對功能的影響最為重要，其中立體構型是多糖生物活性的決定因素之一，另外分子量、取代基、溶解度、粘度等等都能影響其生物活性?，F在國內外研究的主要目標是尋求活性更高，特別是對腫瘤、艾滋病、心血管疾病更有效的多糖。
　　我國多糖研究與美、英、日等國差距很大，現僅局限于用經典的化學方法來測定其一級結構，有關立體構型方面的研究則還未見開展。而多糖活性與二級結構乃至三級結構的關系更為密切，因此研究多糖的立體構型更有利于闡明多糖的構效關系。

掃一掃在手機端打開當前頁

午夜高清国产拍精品福利|日本少妇被黑人粗大的猛激进|黑粗硬大欧美黑白配在线视频|人人澡人人妻人人爽人人蜜桃|亚洲综合精品香蕉久久网

<label id="zbapi"></label>